(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111634489.4 (22)申请日 2021.12.2 9 (71)申请人 源道隆 （苏州） 医学 科技有限公司 地址 215000 江苏省苏州市相城区苏州工 业园区星湖街218号生物纳米园B2楼 513室 (72)发明人 吴喜林　吴稚伟　 (74)专利代理 机构 武汉大楚知识产权代理事务 所(普通合伙) 42257 代理人 徐杨松　杨旭瑞 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C12N 15/13(2006.01) G01N 33/68(2006.01) G01N 33/574(2006.01)A61K 39/395(2006.01) A61K 47/68(2017.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 31/18(2006.01) (54)发明名称 可结合CD4的纳米抗体4 NB357及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种可结合CD4的纳米抗体 4NB357， 包括3个互补决定区CDR1 ‑3， 序列如SEQ   ID NO:1‑3所示。 本发明通过制备CD4蛋白、 利用 噬菌体库展示纳米单抗的平台技术等， 筛选到特 异性结合CD4的纳米抗体V HH， 鉴定了其CDR序列， 并构建了人源化抗体； 并利用评估抗体在治疗 HIV感染的疗效。 本发明利用CD4结合的纳米抗体 为HIV感染的临床治疗以及CD4淋巴瘤的临床治 疗提供潜在的纳米抗体新药， 双靶向抗体新药， 基因治疗新药以及CAR细胞治 疗等。 权利要求书1页 说明书4页 序列表2页 附图3页 CN 114213539 A 2022.03.22 CN 114213539 A 1.一种可结合CD4的纳米抗体， 其特征在于， 包括3个互补决定区CDR1 ‑3， 序列如SEQ  ID  NO:1‑3所示。 2.根据权利要求1所述的纳米抗体， 其特征在于， 所述纳米抗体还包括4个框架区FR1 ‑ 4， 所述FR 1‑4与所述CDR 1‑3按顺序交错 排列。 3.根据权利要求2所述的纳米抗体， 其特征在于， 所述纳米抗体为骆驼源的VHH或人源 化的VHH。 4.权利要求1 ‑3中任一项所述的纳米抗体在制备CD4检测剂中的应用。 5.权利要求1 ‑3中任一项所述的纳米抗体在制备HIV或CD4阳性的T细胞肿瘤的治疗药 物中的应用。 6.权利要求1 ‑3中任一项所述的纳米抗体在制备针对HIV或CD4阳性的T细胞肿瘤的 CAR‑T治疗剂中的应用。 7.一种核酸， 其特 征在于， 编码权利要求1 ‑3中任一项所述的纳米抗体。 8.权利要求7所述的核酸编码序列在制备HIV感染或CD4阳性的T细胞肿瘤的治疗药物 中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114213539 A 2可结合CD4的纳米抗体4NB357及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药领域。 更特别地， 涉及一种可结合CD4的纳米抗体， 还涉及所 述纳米抗体在制备HIV感染或CD4阳性的T细胞肿瘤的治疗药物和诊断剂中的应用。 背景技术 [0002]CD4是T细胞表面上表达的重要受体分子， 但同时也是病毒例如 HIV等攻击T细胞的 靶点。 报道， HIV主要通过包膜表 面的糖蛋白gp120与宿主细胞表 面的特定受体(例如CD4)接 触而影响病毒进入细胞的过程。 抑制gp120和CD4的结合， 可以有效地抑制HIV ‑1对宿主细胞 的感染。 另外， 由于T细胞肿瘤也表达CD4。 因此， 可考虑以CD4为靶点， 利用抗CD4抗体来治疗 HIV感染或CD4阳性的T细胞肿瘤。 [0003]1993年， 一种来源于骆驼科的新型天然抗体被发现。 该抗体天然缺失轻链而只由 重链组成， 其重链包含两个恒定区(CH2和CH3)、 一个铰链区和一个重链可变区(Variable   heavy chain domain， V HH， 即抗原结合位点)， 该重链可变区的相对分子质量约为13 KDa， 仅 为常规抗体的1/10， 且分子高度和直径均在纳米级别， 是目前可获得的最小的功能性抗体 片段， 因此又被称为纳米单抗(Nanobody， Nb)。 因纳米单抗稳定性高(90℃条件下仍不会降 解)、 亲和力高、 与人源抗体同源性超过8 0％、 毒性和免疫原 性均较低等特点， 最近纳米单抗 被广泛用于免疫诊断试剂盒研发、 影像学研发以及针对肿瘤、 炎症、 传染病和神经系统疾病 等领域的抗体药物研发。 [0004]我们期望通过新的技术手段， 筛选出获得能够结合CD4 的抗体， 为预 防和治疗CD4 相关疾病例如HIV感染或CD4阳性T细胞肿瘤等 提供潜在新药。 发明内容 [0005]本发明通过用抗原免疫骆驼， 获取骆驼源纳米单抗及其VHH， 用于治疗HIV感染的 病人。 基于这些研究， 本发明提供了一种可结合CD4的纳米抗体， 其特征在于， 包括3个互补 决定区CDR 1‑3， 序列如SEQ  ID NO:1‑3所示。 [0006]在一个具体实施方案中， 所述纳米抗体还包括4个框架区FR1 ‑4， 所述FR1 ‑4与所述 CDR1‑3按顺序交错排列。 例如， 可将FR1 ‑4序列设计为如SEQ  ID NO:4‑7所示(羊驼源)， 但本 发明的范围不限于此。 抗体的特异 性识别和结合能力主要由CDR区序列决定， FR序列影响不 大， 可根据物种来设计， 这是本领域公知的。 可设计人源、 鼠源或骆驼源的FR区序列来连接 上述CDR， 从而得到一个可 结合CD4的纳米抗体。 [0007]在一个具体实施方案中， 所述纳米抗体为 骆驼源的VH H或人源化的VH H。 [0008]本发明还提供了上述纳米抗体在制备CD4检测剂中的应用。 [0009]本发明还提供了上述纳米抗体在制备HIV或CD 4阳性的T细胞肿瘤的治疗药物中的 应用。 [0010]本发明还提供了上述纳米抗体在制备针对HIV或CD4阳性的T细胞肿瘤的CAR ‑T治 疗剂中的应用。说　明　书 1/4 页 3 CN 114213539 A 3