(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111631314.8 (22)申请日 2021.12.2 9 (71)申请人 杭州市农业科 学研究院 地址 310024 浙江省杭州市西湖区转塘街 道洙泗路261号 (72)发明人 王贤波　严建立　阮松林　钱丽华　 岳二魁　任晓旭　陆秋君　石一珺　 (74)专利代理 机构 杭州中成专利事务所有限公 司 33212 专利代理师 金祺 (51)Int.Cl. A61K 36/87(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 125/00(2006.01) (54)发明名称 微波萃取三叶青块 根总黄酮的方法及应用 (57)摘要 本发明公开了一种微波萃取三叶青块根总 黄酮的方法， 包括以下步骤： 1)、 将三叶青块根洗 净沥干水分后切片干燥， 再粉碎， 得三叶青块根 粉； 2)、 按照1g/30～40mL的料液比， 在三叶青块 根粉中加入浓度为38～42％的乙醇溶液， 在微波 条件下， 于55～ 65℃萃取45～ 55min； 所得萃取液 中含有三叶青块根总黄酮。 本发 明还同时提供了 上述方法的应用： 筛选获得总黄酮 含量高的三叶 青种源。 权利要求书1页 说明书11页 附图3页 CN 114470071 A 2022.05.13 CN 114470071 A 1.微波萃取三叶青块 根总黄酮的方法， 其特 征在于包括以下步骤： 1)、 将三叶青块 根洗净沥干水分后切片干燥， 再粉碎， 得三叶青块 根粉； 2)、 按照1g/30～40mL的料液比， 在三叶青块根粉中加入浓度为38～42％的乙醇溶液， 在微波条件下， 于 55～65℃萃取45～5 5min； 所得萃取液中含有三叶青块 根总黄酮。 2.根据权利要求1所述的微波 萃取三叶青块 根总黄酮的方法， 其特 征在于： 所述步骤1)为： 将三叶青块根洗净、 沥干水分后切成3～5mm的片状， 于60 ±5℃低温烘 干至含水率≤10％， 再粉碎至过6 0目筛， 得三叶青块 根粉。 3.根据权利要求2所述的微波 萃取三叶青块 根总黄酮的方法， 其特 征在于： 所述步骤2)为： 按照1g/35mL的料液比， 在三叶青块根粉中加入浓度为40％的乙醇溶 液， 在微波功率为400W的微波条件下， 于60℃萃取50min； 所得萃取液中含有三叶青块根总 黄酮。 4.如权利要求1～3任一方法的应用， 其特征在于： 筛选获得总黄酮含量高的三叶青种 源。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114470071 A 2微波萃取三叶青块根总黄酮的方 法及应用 技术领域 [0001]本发明涉及一种三叶青块 根中总黄酮的微波 萃取提取 方法及应用。 背景技术 [0002]三叶青为葡萄科崖爬藤属草质藤本。 是我国特有的珍稀药用植物。 其药用部位为 三叶青的块根、 果实或全草， 以地下块根和果实的药用效果最好， 全年均可采收， 晒干或鲜 用均可。 三叶青自然分布于浙江、 江西、 福建、 台湾、 广东、 广西、 贵州、 云南等地， 不同产地的 三叶青质量和销售价格参差不齐。 三叶青为民间常用的中草药， 具有抗癌抗肿瘤、 抗炎、 镇 痛与解热、 保肝 等作用， 且毒副作用小， 是西药 无法代替的 “植物抗生素”。 [0003]三叶青中的黄酮类化合物是其主要的有效成分， 研究发现， 三叶青总黄酮具有广 谱的抗肿瘤作用， 对肝癌、 肺癌、 胃癌、 乳腺癌等具有显著的抑制生长和诱导细胞凋亡与自 噬的作用， 显示了良好的抗肿瘤药物开发前景， 提示其含量高低可作为潜在筛选优质三叶 青种源的指标。 微波萃取具有设备简单、 适用范围广、 萃取效率高、 重现性好、 节省时间、 节 省试剂、 污染小等特点。 目前三叶青中总黄酮含量主要是通过测定三叶青的甲醇或乙醇提 取液获得。 现有专利中提及三叶青总黄酮的提取方法主要是超声提取和加热回流提取， 存 在乙醇用量较高， 提取时间较长， 操作较繁琐、 提取率较低等问题。 例如： [0004]专利文献CN  112970507  A公开了一种可兼顾块根产量和黄酮含量的三叶青高效 栽培技术， 其用70％乙醇、 在料液比1:20(g ·mL‑1)、 提取温度50℃、 超声提取40min 条件下提 取三叶青块根中总黄酮然后检测。 虽然此法提取时间较短， 但此方法乙醇用量多， 提取率较 低。 [0005]专利文献CN  113720931  A公开了一种三叶青药材的质量评价方法， 其用60％乙 醇、 在料液比1:30(g ·mL‑1)、 83℃恒温水浴锅中进行冷凝回流提取65min， 将滤液抽滤提取 三叶青中总黄酮然后检测。 此 方法提取时间较长， 操作较繁琐， 提取率较低。 [0006]CN112007091A的发明 《一种从三叶青茎叶中同时提取多糖和黄酮的方法》 ： 将 三叶 青茎叶烘干、 粉碎得到三叶青茎叶干粉； 将三叶青茎叶干粉与酸性乙醇溶液混合， 得到 混合 液； 将混合液进行水浴处理， 离心得第一上清液和 第一残渣； 将第一残渣与去离子水混合均 匀， 进行微波提取， 提取物离心得第二上清液和 第二残渣； 将第一上清液和第二上清液合并 混合后旋蒸去除乙醇， 加入NaCl至饱和， 而后加入乙酸乙酯溶液进行萃取、 分液； 上层液经 减压浓缩干燥后得到三叶青黄酮， 下层液经透析、 减压浓缩、 沉淀后得到三叶青多糖。 酸性 乙醇溶液为浓盐酸与乙醇的混合溶液， 浓盐酸的量占乙醇体积比为10～15％， 三叶青黄酮 的得率为0.8％。 [0007]CN108837041A的发明 《三叶青片剂及其制备方法》 告知： 三叶青块根细粉置于加速 溶剂萃取仪中， 加入体积分数为50％～90％的乙醇， 料液比为1:12～1:20， 控制提取温度为 50～70℃， 提取压力 为56～136bar， 提取时间为10min， 提取次数为1次， 制得快速溶剂萃取 物。 因此， 该专利得出的结论是： 最优乙醇浓度为70～80％， 此对应所得的三叶青黄酮的含 量高于其他提取溶剂。 且， 该方案所用One  PSE型快速压力溶剂萃取仪是为 实验室样品处理说　明　书 1/11 页 3 CN 114470071 A 3