(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111591517.9 (22)申请日 2021.12.23 (71)申请人 南京大学 地址 210008 江苏省南京市栖霞区仙林大 道163号 (72)发明人 吴喜林　吴稚伟　王宏伟　 (74)专利代理 机构 武汉大楚知识产权代理事务 所(普通合伙) 42257 代理人 徐杨松　杨旭瑞 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C12N 15/13(2006.01) G01N 33/574(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61K 39/00(2006.01)A61K 48/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) (54)发明名称 抗CD19抗体及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种抗CD19纳米抗体， 包括3个 互补决定区CDR1 ‑3， 序列分别如SEQ  ID NO:1‑3 所示本发明针对B细胞恶性肿瘤 进行纳米抗体药 物开发， 通过制备人CD19蛋白、 免疫羊驼、 利用噬 菌体库展示纳米单抗的平台技术等， 筛选到特异 性结合CD19的纳米抗体VHH， 鉴定了其CDR序列， 并构建了 人源化的纳米抗体； 同时利用流式细胞 术鉴定其结合B细胞淋巴瘤细胞的能力。 本发明 为B细胞恶性肿瘤的临床治疗提供潜在的纳米抗 体新药。 权利要求书1页 说明书4页 序列表2页 附图3页 CN 114292329 A 2022.04.08 CN 114292329 A 1.一种抗CD19纳米抗体， 其特征在于， 包括3个互补决定区CDR1 ‑3， 序列分别如SEQ  ID  NO:1‑3所示。 2.根据权利要求1所述的纳米抗体， 其特征在于， 所述纳米抗体还包括4个框架区FR1 ‑ 4， 所述FR 1‑4与所述CDR 1‑3按顺序交错 排列。 3.根据权利要求1所述的纳米抗体， 其特征在于， 所述纳米抗体为羊驼源的VHH或人源 化的VHH。 4.权利要求1 ‑3中任一项所述的纳米抗体在制备CD19检测剂中的应用。 5.根据权利要求 4所述的应用， 其特 征在于， 所述CD19为细胞表面的CD19。 6.权利要求1 ‑3中任一项所述的纳米抗体在制备肿瘤治疗药物中的应用。 7.权利要求1 ‑3中任一项所述的纳米抗体在制备CAR  T细胞治疗剂中的应用。 8.一种核酸， 其特 征在于， 编码权利要求1 ‑3中任一项所述的纳米抗体。 9.权利要求8所述的核酸在制备基因治疗药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114292329 A 2抗CD19抗体及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药领域。 更特别地， 涉及一种抗CD19抗体， 以及该抗体在制备B 细胞恶性肿瘤检测剂和治疗药物中的应用。 背景技术 [0002]B细胞恶性肿瘤是常见的血液恶性肿瘤， 尽管多数患者对目前的一线治疗有反应， 但复发率高， 预后差， 仍然是难治的恶性肿瘤之一。 近年， 以CD19作为B细胞恶性肿瘤免疫治 疗的分子靶点受到极大的关注。 [0003]CD19是正常及恶性B淋巴细胞特异性表面蛋白， 几乎不在其他细胞表面表达， 参与 PI3/AKT通路的调节， 在B细胞的增殖与分化中起到很至关重要的作用。 由于CD19在B淋巴细 胞表达的特异性和肿瘤细胞表达的广泛性， 且在B细胞恶性转化过程中不丢失， 而造血干细 胞及pro‑B细胞不表达CD19， 治疗停止后， B细胞可以得到有效的补 充， 因此CD19其 成为一个 颇具潜力的B淋巴细胞恶性肿瘤免疫 治疗的分子靶点。 [0004]1993年， 一种来源于骆驼科的新型天然抗体被发现。 该抗体天然缺失轻链而只由 重链组成， 其重链包含两个恒定区(CH2和CH3)、 一个铰链区和一个重链可变区(Variable   heavy chain domain， V HH， 即抗原结合位点)， 该重链可变区的相对分子质量约为13 KDa， 仅 为常规抗体的1/10， 且分子高度和直径均在纳米级别， 是目前可获得的最小的功能性抗体 片段， 因此又被称为纳米单抗(Nanobody， Nb)。 因纳米单抗稳定性高(90℃条件下仍不会降 解)、 亲和力高、 与人源抗体同源性超过8 0％、 毒性和免疫原 性均较低等特点， 最近纳米单抗 被广泛用于免疫诊断试剂盒研发、 影像学研发以及针对肿瘤、 炎症、 传染病和神经系统疾病 等领域的抗体药物研发。 [0005]目前， 美国市场已有一些CD19 ‑CART细胞治疗药物， 但是国内目前尚无针对B细胞 恶性肿瘤的细胞治疗 药物上市， 因此迫切需要开 发针对CD19的抗体， 用于制备B细胞恶性肿 瘤等与CD19相关的疾病的治疗药物。 发明内容 [0006]本发明通过用抗原免疫羊驼， 获取羊驼源纳米单抗及其VHH， 用于B细胞恶性肿瘤 治疗。 基于这些研究， 本发 明提供了一种可结合CD19的纳米抗体， 包括3个互补决定区CDR1 ‑ 3， 序列分别如SEQ  ID NO:1‑3所示。 [0007]在一个具体实施方案中， 所述纳米还包括4个框架区FR1 ‑4， 所述FR1 ‑4与所述 CDR1‑3交错排列。 例如， 可将F R1‑4序列设计为如SEQ  ID NO:4‑7所示(羊驼源)， 但本发明的 范围不限于此。 抗体的特异性识别和结合能力主要由CDR区序列决定， FR序列影响不大， 可 根据物种来设计， 这是本领域公知的。 可设计人源、 鼠源或骆驼源的FR区序列来连接上述 CDR， 从而得到一个可 结合CD19的纳米抗体。 [0008]本发明还提供了上述纳米抗体在检测细胞表面CD19中的应用。 [0009]本发明还提供了上述多肽在制备CD19相关疾病例如B细胞恶性肿瘤的治疗药物中说　明　书 1/4 页 3 CN 114292329 A 3