(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202180006032.0 (22)申请日 2021.12.24 (66)本国优先权数据 202110022268.5 2021.01.08 CN (85)PCT国际申请进入国家阶段日 2022.04.21 (86)PCT国际申请的申请数据 PCT/CN2021/14131 1 2021.12.24 (87)PCT国际申请的公布数据 WO2022/148255 EN 202 2.07.14 (71)申请人 深圳市珈钰生物科技有限公司 地址 518116 广东省深圳市龙华区观光路 1301银星智界二期1号楼B座 4楼 申请人 广东圣赛生物科技有限公司 (72)发明人 徐洋　(74)专利代理 机构 北京市君 合律师事务所 11517 专利代理师 张怡　汪烨君 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/867(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 树突细胞激活性嵌合 抗原受体和其用途 (57)摘要 本公开提供了一种用于在免疫抑制性肿瘤 环境中激活树突细胞(DC)的嵌合抗原受体 (CAR)。 本公开还提供了包含所述CAR的组合物、 编码所述CAR的多核苷酸、 包 括编码所述CAR的多 核苷酸的载体、 包括所述CAR的经工程化的细胞， 以及使用所述组合物、 所述多核苷酸、 所述载体 和所述经工程 化的细胞的方法。 权利要求书5页 说明书41页 序列表18页 附图27页 CN 115135674 A 2022.09.30 CN 115135674 A 1.一种多核苷酸， 其编码嵌合抗原受体(CA R)， 其中所述CA R包括(1)细胞外抗原结合结 构域， (2)跨膜结构域和(3)细胞内信号传导结构域， 其中所述CAR能够在免疫抑制性肿瘤微 环境中激活树 突细胞。 2.根据权利要求1所述的多核苷酸， 其中所述免疫抑制性肿瘤微环境包括肿瘤和/或肿 瘤浸润免疫细胞， 所述肿瘤和/或肿瘤 浸润免疫细胞： 1)表达免疫抑制性分子， 和/或2)缺乏 免疫刺激细胞因子 。 3.根据权利要求2所述的多核苷酸， 其中所述免疫抑制性分子选自由以下组成的组： PD‑1、 TIM‑3、 TIGIT、 LAG ‑3、 A2AR、 BTLA(CD272)、 CTLA ‑4(CD152)、 IDO1、 IDO2、 TDO、 NOX2、 VISTA、 SIGLEC7(CD328)、 PVR(CD155)和SIGLEC9(CD329)、 PD ‑L1、 PD‑L2、 B7‑H3(CD276)、 B7 ‑ H4(VTCN1)、 PVR(CD15 5)、 HLA I类、 唾液酸糖蛋白、 CD1 12、 CD113、 半乳凝素9、 CD24和CD47。 4.根据权利要求3所述的多 核苷酸， 其中所述免疫抑制性分子是CTLA ‑4和/或PD‑L1。 5.根据权利要求2所述的多核苷酸， 其中所述免疫刺激细胞因子选自TNF ‑a、 IFN‑β、 IFN‑γ、 IL‑1、 IL‑2、 IL‑4、 IL‑6、 IL‑8、 IL‑10、 IL‑12、 IL‑18、 粒细胞 ‑巨噬细胞集落刺激因子 和其组合。 6.根据权利要求2所述的多核苷酸， 其中所述肿瘤包括表达CTLA4 ‑Ig和/或PD ‑L1的细 胞。 7.根据权利要求1所述的多核苷酸， 其中所述免疫抑制性肿瘤微环境包括对过继性细 胞疗法的单一疗法(例如， CAR ‑T单一疗法)的应答 性较差的肿瘤。 8.根据权利要求1所述的多核苷酸， 其中所述细胞内信号传导结构域包括选自由以下 组成的组的树突细胞激活受体的细胞质结构域： RIG ‑1、 NLRP10、 DEC‑205、 BDCA ‑2、 CD86、 4 ‑ 1BBL、 OX40L、 CD40、 IFNAR、 TLR4、 TNFR(例如， TNFR2)、 CD80、 CD40L、 CD367(DCIR)、 CD207 (Langeri n)、 CD371(DCAL ‑2、 CLEC12a)、 CD204、 CD3 6、 IFNγR、 Decti n‑1和FcγR或其组合。 9.根据权利要求1所述的多核苷酸， 其中所述细胞内信号传导结构域包括Dectin ‑1的 细胞质结构域和FcγR的细胞质结构域。 10.根据权利要求9所述的多核苷酸， 其中Dectin ‑1的所述细胞质结构域和FcγR的所 述细胞质结构域串联 连接。 11.根据权利要求10所述的多核苷酸， 其中Dectin ‑1的所述细胞质结构域包括SEQ  ID  NO:1中所示的氨基酸序列或其任何功能形式。 12.根据权利要求10或11所述的多核苷酸， 其 中FcγR的所述细 胞质结构域包括SEQ  ID  NO:2中所示的氨基酸序列或其任何功能形式。 13.根据前述权利要求中任一项所述的多核苷酸， 其中所述细胞内信号传导结构域包 括SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列或其任何功能形式。 14.根据前述权利要求中任一项所述的多核苷酸， 其中所述细胞内信号传导结构域包 括由SEQ ID NO:4中所示的核酸序列编码的氨基酸序列或其任何功能形式。 15.根据前述权利要求中任一项所述的多核苷酸， 其中所述细胞外抗原结合结构域包 括单链可变片段(scFv)。 16.根据权利要求15所述的多核苷酸， 其中所述scFv对肿瘤表面标志物(例如， 实体瘤 表面标志 物)具有特异性。 17.根据权利要求16所述的多核苷酸， 其中所述肿瘤表面标志物选自由以下组成的组：权　利　要　求　书 1/5 页 2 CN 115135674 A 2EphA2、 CD19、 CD70、 CD133、 CD147、 CD17 1、 DLL3、 EGFRv III、 间皮素、 神经节苷 脂GD2、 FAP(成纤 维细胞激活蛋白)、 FBP(叶酸结合蛋白)、 Lewis  Y、 密封蛋白18.2、 IL13Rα 2、 HER2、 MDC1、 PMSA (前列腺膜特异性 抗原)、 ROR 1、 B7‑H3、 CAIX、 CD13 3、 CD171、 C EA、 GPC3、 MUC1、 NKG2D。 18.根据前述权利要求中任一项所述的多 核苷酸， 其中所述CAR进一 步包括信号肽。 19.根据权利要求18所述的多 核苷酸， 其中所述信号肽包括CD 8α 的信号肽。 20.根据权利要求19所述的多核苷酸， 其 中CD8α 的所述信号肽包括SEQ  ID NO:5中所示 的序列或其任何功能形式。 21.根据前述权利要求中任一项所述的多核苷酸， 其中所述跨膜结构域包括CD8α 的跨 膜结构域。 22.根据权利要求21所述的多核苷酸， 其 中CD8α 的所述跨膜结构域包括SEQ  ID NO:6中 所示的序列或其任何功能形式。 23.根据前述权利要求中任一项所述的多核苷酸， 其中所述细胞外抗原结合结构域通 过铰链区连接 到所述跨膜结构域。 24.根据权利要求23所述的多 核苷酸， 其中所述铰链区包括CD 8α 的铰链区。 25.根据权利要求24所述的多核苷酸， 其 中CD8α 的所述铰链区包括SEQ  ID NO:7中所示 的序列或其任何功能形式。 26.根据前述权利要求中任一项所述的多 核苷酸， 其是DNA或RNA。 27.一种多肽， 其由根据前述权利要求中任一项所述的多 核苷酸编码。 28.一种载体， 其包括根据权利要求1到26中任一项所述的多核苷酸， 其中编码所述CAR 的所述多 核苷酸可操作地连接 到用于表达所述CAR的至少一个调控多 核苷酸元件。 29.根据权利要求28所述的载体， 其中所述载体是质粒载体、 病毒载体、 转座子、 定点插 入载体或自杀式表达载体。 30.根据权利要求29所述的载体， 其中所述病 毒载体是慢病 毒载体、 逆转录病 毒载体或 AAV载体。 31.根据权利要求3 0所述的载体， 其中所述病毒载体是慢病毒载体。 32.一种经工程 化的细胞， 其包括 根据权利要求27 所述的多肽。 33.根据权利要求32所述的经工程化的细胞， 其中所述经工程化的细胞是树突细胞或 其前体细胞或祖细胞。 34.根据权利要求32或33所述的经工程化的细胞， 其中所述树突细胞或其前体细胞或 祖细胞源自外周血细胞、 骨髓细胞、 胚胎干细胞或诱 导性多能干细胞。 35.一种产生根据权利要求32到34中任一项所述的经工程化的细胞的方法， 所述方法 包括在适合于表达根据权利要求 1到26中任一项 所述的多核苷酸的条件下向起始细胞引入 根据权利要求28到 31中任一项所述的载体。 36.根据权利要求35所述的方法， 其中所述起始细胞是树突细胞或其前体细胞或祖细 胞。 37.根据权利要求36所述的方法， 其中所述树突细胞或其前体细胞或祖细胞源自外周 血细胞、 骨髓细胞、 胚胎干细胞或诱 导性多能干细胞。 38.一种细胞群 体， 其通过根据权利要求3 5到37中任一项所述的方法离体产生。 39.根据权利要求38所述的细胞群体， 其中至少70％的所述细胞群体表达可检测水平权　利　要　求　书 2/5 页 3 CN 115135674 A 3