(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111630520.7 (22)申请日 2021.12.28 (66)本国优先权数据 PCT/CN2020/140172 2020.12.28 CN (71)申请人 广州辑因医疗科技有限公司 地址 510000 广东省广州市南沙区珠 江街 南江二路6号10 栋 申请人 博雅辑因 （北京） 生物科技有限公司 (72)发明人 方日国　史忠玉　杨卉慧　袁鹏飞　 (74)专利代理 机构 北京彩和律师事务所 1 1688 专利代理师 张红春 (51)Int.Cl. C12N 5/0789(2010.01) C12N 5/078(2010.01) A61K 9/00(2006.01)A61K 35/28(2015.01) A61P 7/00(2006.01) A61P 7/04(2006.01) A61P 7/06(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A61P 31/12(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) A61P 37/02(2006.01) (54)发明名称 用于扩增并维持HSCs自我更新能力和分化 潜能的培 养基组合物及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于扩增并维持造血干 细胞(hematopoietic  stem cells,HSCs)自我更 新能力和分化潜能的培养基组合物、 细胞群体及 其应用。 所述培养基组合物包括造血干细胞培养 基和PDGFR靶点的小分子抑制剂。 申请人首次证 明了PDGFR的抑制剂能够在体外培养过程中显著 扩增HSCs， 同时保持HSCs高比例的自我更新能 力。 申请人发现的PDGF R抑制剂扩增LT‑HSCs的效 果显著优于已报道的化学小分子。 这是首次证明 并报道了PDGF/PDGFR信号通路在造血干细胞扩 增并维持自我更新能力方面发挥重要作用。 申请 人的研究结果可以实现HSCs的体外扩增的同时 维持细胞较高比例的干性， 在此基础上进行HSCs 移植的临床应用， 可广泛治疗一系列血液系统疾 病。 权利要求书2页 说明书20页 附图10页 CN 114752563 A 2022.07.15 CN 114752563 A 1.一种用于扩增并维持造血干细胞(hematop oietic stem cells,HSCs)自我更新能力 和分化潜能的培 养基组合物， 其包括造血干细胞培 养基和PDGFR靶点的小分子抑制剂。 2.根据权利要求1所述的组合物， 其中， 所述PDGFR靶点的小分子抑制剂选自下述中的 一种或多种： AG1296、 PDGFR  inhibitor  1、 Imatinib、 PP121、 Ponatinib、 Axitinib、 Trapidil和Erdafiti nib， 优选为AG12 96。 3.根据权利要求1或2所述的培养基组合物， 其中， 所述造血干细胞培养基包含： 1)基础 培养基(优选无 血清的基础培 养基)； 2)生长因子； 和/或3)细胞因子 。 4.根据权利要求3所述的培养基组合物， 其中， 所述生长因子或细胞因子选自如下的一 种或多种： 生长因子Flt ‑3L、 生长因子SCF、 生长因子TPO和白细胞介素I L‑6。 5.根据权利要求4所述的培养基组合物， 其中所述生长因子或细胞因子在所述培养基 组合物中的浓度如下 所示： 所述生长因子Flt ‑3L的浓度为10 ‑110ng/ml， 优选为5 0‑100ng/ml； 所述生长因子SCF的浓度为10 ‑110ng/ml， 优选为5 0‑100ng/ml； 所述生长因子TPO的浓度为10 ‑110ng/ml， 优选为5 0‑100ng/ml； 所述白细胞介素I L‑6的浓度为1 ‑50ng/ml， 优选为1 ‑20ng/ml。 6.根据权利要求1 ‑5中任一项所述的培养基组合物， 其中， 所述PDGFR靶点的小分子抑 制剂在所述培 养基组合物中的浓度为0.1 ‑100 μM， 优选为0.5 ‑50 μM， 进一 步优选为1 ‑10 μM。 7.根据权利要求1 ‑6中任一项所述的培养基组合物， 其中， 所述HSCs来源于骨髓、 动员 外周血、 脐带 血、 冻存复苏的HSCs或经 过基因编辑改造的HSCs。 8.一种促进HSCs扩增并维持HSCs自我更新能力的方法， 包括在含有PDGFR靶点的小分 子抑制剂的培 养基组合物中体外 培养HSCs。 9.根据权利要求8所述的方法， 其中， 所述PDGFR靶点的小分子抑制剂选自下述中的一 种或多种： A G1296、 PDGFR  inhibitor  1、 Imatinib、 PP121、 Ponatinib、 Axitinib、 Trapidil 和Erdafiti nib， 优选为AG12 96。 10.根据权利要求8或9所述的方法， 其中， 所述造血干细胞培养基包含： 1)基础培养基 (优选无血清的基础培 养基)； 2)生长因子； 和/或3)细胞因子 。 11.根据权利要求10所述的方法， 其中， 所述生长因子或细胞因子选自如下的一种或多 种： Flt‑3L、 生长因子SCF、 生长因子TPO和白细胞介素I L‑6。 12.根据权利要求11所述的方法， 其中所述生长因子或细胞因子在所述培养基组合物 中的浓度如下 所示： 所述生长因子Flt ‑3L的浓度为10 ‑110ng/ml， 优选为5 0‑100ng/ml； 所述生长因子SCF的浓度为10 ‑110ng/ml， 优选为5 0‑100ng/ml； 所述生长因子TPO的浓度为10 ‑110ng/ml， 优选为5 0‑100ng/ml； 所述白细胞介素I L‑6的浓度为1 ‑50ng/ml， 优选为1 ‑20ng/ml。 13.根据权利要求8 ‑12任一项所述的方法， 其中， 所述PDGFR靶点的小分子抑制剂在所 述培养基组合物中的浓度为0.1 ‑100 μM， 优选为0.5 ‑50 μM， 进一 步优选为1 ‑10 μM。 14.根据权利 要求8‑13中任一项所述的方法， 其中， 所述HSCs来源于骨髓、 动员外周血、 脐带血、 冻存复苏的HSCs或经 过基因编辑改造的HSCs。 15.根据权利要求8 ‑14中任一项所述的方法， 其中， 体外培养时间为约4 ‑21天， 优选为权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114752563 A 2约6‑15天， 进一 步优选为约6 ‑10天， 最优选为约6 ‑8天。 16.根据权利 要求8‑15中任一项所述的方法， 其 中， 体外培养后， CD34+表型的HSCs细胞 数占全部细胞中的比例为 40‑85％， 优选为6 0‑85％， 进一 步优选为75 ‑80％。 17.根据权利要求8 ‑16中任一项所述的方法， 其中， 体外培养后， CD34+CD90+表型的 HSCs细胞 数占全部细胞中的比例为6 ‑15％， 优选为8 ‑15％， 进一 步优选为8 ‑12％。 18.根据权利要求8 ‑17中任一项所述的方法， 其中， 体外培养后， CD34+CD90+CD45RA ‑表 型的HSCs细胞 数占全部细胞中的比例为2 ‑10％， 优选为2 ‑6％， 进一 步优选为 4‑5％。 19.根据权利要求8 ‑18中任一项所述的方法， 其中， 体外培养后， CD34+CD45+CD90+ CD45RA‑CD38‑表型的HSCs的细胞 数占全部细胞中的比例为2 ‑5％， 优选为2.5 ‑4％。 20.一种HSCs输注液， 其中， CD34+表型的HSCs细胞数占全部细胞总数的比例为40 ‑ 85％， 优选为6 0‑85％， 进一 步优选为75 ‑80％。 21.根据权利要求20所述的HSCs输注液， 其中， CD34+CD90+表型的HSCs细胞数占全部细 胞中的比例为6 ‑15％， 优选为8 ‑15％， 进一 步优选为8 ‑12％。 22.根据权利要求20或21所述的HSCs输注液， 其中， CD34+CD90+CD45RA ‑表型的HSCs细 胞数占全部细胞中的比例为2 ‑10％， 优选为2 ‑6％， 进一 步优选为 4‑5％。 23.根据权利要求20 ‑22任一项所述的HSCs输注液， 其中， CD34+CD45+CD90+CD45RA ‑ CD38‑表型的HSCs的细胞占全部细胞中的比例为2 ‑5％， 优选为2.5 ‑4％。 24.根据权利要求20 ‑23任一项所述的HSCs输注液， 其通过权利 要求8‑19任一项的方法 获得。 25.一种给有需要的个体补充血细胞的方法， 包括将权利要求20 ‑24任一项所述的HSCs 输注液输注给 所述个体。 26.根据权利 要求25的方法， 其中所述HSCs输注液输注给所述个体后， 所述HSCs在所述 个体中定植、 分化 为血细胞。 27.根据权利要求25或26的方法， 其中所述个体为罹患出血、 贫血、 癌症、 白血病、 自身 免疫病、 病毒或细菌感染的个 体。 28.PDGFR靶点的小分子抑制剂在促进HSCs扩增并维持HSCs自我更新能力中的用途， 优 选的， 所述PDGFR靶点的小分子抑制剂选自下述中的一种或多种： AG1296、 PDGFR  inhibitor   1、 Imatinib、 PP121、 Ponatinib、 Axiti nib、 Trapidi l和Erdafiti nib， 优选为AG12 96。