(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111613484.3 (22)申请日 2021.12.27 (66)本国优先权数据 202110930268.5 2021.08.13 CN (71)申请人 上海鑫湾生物科技有限公司 地址 201506 上海市金山区豪业路518号6 幢 (72)发明人 徐建青　张晓燕　廖启彬　丁相卿　 (74)专利代理 机构 北京泛华伟业知识产权代理 有限公司 1 1280 代理人 郭广迅 (51)Int.Cl. C07K 14/47(2006.01) C12N 15/12(2006.01) C12N 15/867(2006.01)C12N 15/67(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61K 35/17(2015.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 缺氧触发的人工转录因子、 转录控制系统及 其应用 (57)摘要 本发明提供了一种缺氧触发的人工转录因 子。 本发明还提供了一种缺氧触发的转录控制系 统， 所述转录控制系统包含编码HATF的核 酸序列 和RE。 根据本发明所述的缺氧触发的转录控制系 统， 其中所述缺氧触发的转录控制系统包括上下 游连锁的两套转录控制单元， 其中所述上游转录 控制单元包含用于控制HATF的缺氧触发的转录 反应元件和编码HATF的核 酸序列； 所述下游转录 控制单元包含RE和目的基因。 本发明的人工转录 因子HATF和识别元件RE联合调控目的基因的放 大倍数可达百倍， 远优于传统人工转录因子 (GAL4)及其反应元件(UAS)的10倍上调。 权利要求书3页 说明书12页 序列表9页 附图6页 CN 114249807 A 2022.03.29 CN 114249807 A 1.一种缺氧触发的人工转录因子 HATF， 所述HATF包 含： (1)SEQ ID NO:1所示的序列； (2)与SEQ  ID NO:1所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、 缺失或添加的序 列； 或 (3)与SEQ  ID NO:1所示的序列具有至少80％、 至少85％、 至少90％、 至少91％、 至少 92％、 至少93％、 至少94％、 至少95％、 至少96％、 至少97％、 至少98％、 至少99％、 或100％的 序列同一 性的序列。 2.编码如权利要求1所述的HATF的核酸序列。 3.如权利要求1所述的HATF的识别元件RE， 所述RE包 含选自以下的核心序列： (1)SEQ ID NO： 2所示的序列， 或其互补序列； (2)在严格杂交条件下与SEQ  ID NO： 2所示的序列杂交的序列； (3)与SEQ  ID NO： 2所示的序列具有至少85％、 90％、 91％、 92％、 93％、 94％、 95％、 96％、 97％、 98％、 98.5％、 9 9％或99.5％序列同一 性的序列； 或 (4)由通过缺失、 取代、 插入或增加一个或多个核苷酸而衍生化SEQ  ID NO： 2所示的序 列获得的序列； 优选地， 所述RE包含所述核心序列的多个拷贝和最小启动子； 更优选地， 所述多个拷贝 为两个拷贝、 三个拷贝、 四个拷贝、 五个拷贝、 六个拷贝、 七个拷贝、 八个拷贝、 九个拷贝或十 个拷贝； 进一步优选地， 所述识别元件RE包含所述核心序列的五个或六个拷贝和最小启动 子； 更进一步优选地， 所述RE包 含选自以下的序列： (1)SEQ ID NO： 3所示的序列， 或其互补序列； (2)在严格杂交条件下与SEQ  ID NO： 3所示的序列杂交的序列； (3)与SEQ  ID NO： 3所示的序列具有至少85％、 90％、 91％、 92％、 93％、 94％、 95％、 96％、 97％、 98％、 98.5％、 9 9％或99.5％序列同一 性的序列； 或 (4)由通过缺失、 取代、 插入或增加一个或多个核苷酸而衍生化SEQ  ID NO： 3所示的序 列获得的序列； 最优选地， 所述RE如SEQ  ID NO： 3所示。 4.一种缺氧触发的转录控制系统， 所述转录控制系统包含如权利要求2所述的核酸序 列和如权利要求3所述的RE； 优选地， 所述缺氧触发的转录控制系统包括上下游连锁的两套转录控制单元， 其中所 述上游转录控制单元包含用于控制HATF的缺氧触发的转录反应元件HRTE和编码HATF的核 酸序列； 所述下游转录控制单 元包含RE和目的基因G OI。 5.根据权利要求4所述的缺氧触发的转录控制系统， 其中， 所述上下游连锁的转录控制 单元非线性串联， 位于 两个载体； 优选地， 所述 转录控制系统具有如下式 中任一项所示的组合形式： HATF‑HRTE和RE ‑GOI； HATF‑HRTE和GOI‑RE； HRTE‑HATF和GOI‑RE或 HRTE‑HATF和RE ‑GOI；权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114249807 A 2或所述上 下游连锁的转录控制单 元线性串联， 位于同一载体； 优选地， 所述 转录控制系统具有如下式 中任一项所示的组合形式： HATF‑HRTE‑RE‑GOI； HATF‑HRTE‑GOI‑RE； HRTE‑HRE‑GOI； HRTE‑HATF‑GOI‑RE； RE‑GOI‑HATF‑HRTE； RE‑GOI‑HRTE‑HATF； GOI‑RE‑HATF‑HRTE或 GOI‑RE‑HRTE‑HATF。 6.根据权利要求4或5所述的缺氧触发的转录控制系统， 其中， 所述HRTE选自缺氧诱导 基因的部分序列； 优选地， 所述HRTE选自血管内皮生长因子基因、 红细胞生成素基因、 糖酵 解酶基因的侧翼区； 更优选地， 所述HRTE的核心序列为5 ’ ‑(A/G)CGT(G/ C)‑3’； 优选地， 所述HRTE包 含选自以下的核心序列： (1)SEQ ID NO： 4所示的序列， 或其互补序列； (2)在严格杂交条件下与SEQ  ID NO： 4所示的序列杂交的序列； (3)与SEQ  ID NO： 4所示的序列具有至少85％、 90％、 91％、 92％、 93％、 94％、 95％、 96％、 97％、 98％、 98.5％、 9 9％或99.5％序列同一 性的序列； 或 (4)由通过缺失、 取代、 插入或增加一个或多个核苷酸而衍生化SEQ  ID NO： 4所示的序 列获得的序列； 优选地， 所述HRTE包含所述核心序列的多个拷贝和最小启动子； 更优选地， 所述多个拷 贝为两个拷贝、 三个拷贝、 四个拷贝、 五个拷贝、 六个拷贝、 七个拷贝、 八个拷贝、 九个拷贝或 十个拷贝； 进一 步优选地， 所述HRTE包 含所述核心序列的五个或六个 拷贝和最小启动子； 更进一步优选地， 所述HRTE包 含选自以下的序列： (1)SEQ ID NO： 5所示的序列， 或其互补序列； (2)在严格杂交条件下与SEQ  ID NO： 5所示的序列杂交的序列； (3)与SEQ  ID NO： 5所示的序列具有至少85％、 90％、 91％、 92％、 93％、 94％、 95％、 96％、 97％、 98％、 98.5％、 9 9％或99.5％序列同一 性的序列； 或 (4)由通过缺失、 取代、 插入或增加一个或多个核苷酸而衍生化SEQ  ID NO： 5所示的序 列获得的序列； 最优选地， 所述HRTE如SEQ  ID NO： 5所示。 7.根据权利要求4至6 中任一项所述的缺氧触发的转录控制系统， 其中， 所述GOI选自 以 下的一种或多种： 细胞因子和趋化因子， 优选选自GM ‑CSF、 IFN‑α /β /γ、 IL ‑2、 IL‑3、 IL‑7、 IL‑12、 IL‑15、 IL‑21、 IL‑33、 IL‑35、 IL‑37、 CCL4、 CCL20、 CXCL9、 CXCL10、 CXCL11、 CXCL12、 CXCL13、 MIP ‑1α 或 MIP‑1β； 细胞毒性分子， 优选选自TNF ‑α、 针对不同抗原靶标的T细胞衔接子、 针对不同抗原靶标 的嵌合抗原受体、 凋亡基因、 焦亡基因或毒素； 针对不同抗原靶标的激动型抗体， 优选选自抗CD28抗体、 抗4 ‑1BB抗体、 抗ICOS抗体、 抗权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114249807 A 3