(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111680865.3 (22)申请日 2021.12.31 (66)本国优先权数据 202110353488.6 2021.0 3.31 CN PCT/CN2021/10 3931 2021.07.01 CN (71)申请人 中国科学院生物 物理研究所 地址 100101 北京市朝阳区大屯路15号 (72)发明人 彭华　孙士玉　 其他发明人请求 不公开姓名　 (74)专利代理 机构 中科专利商标代理有限责任 公司 11021 专利代理师 高丽娜　张莹 (51)Int.Cl. A61K 39/385(2006.01) A61K 39/215(2006.01)A61K 39/00(2006.01) A61K 39/02(2006.01) A61K 39/12(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A61P 31/12(2006.01) A61P 31/14(2006.01) (54)发明名称 融合蛋白疫苗平台的构建与应用 (57)摘要 本发明涉及融合蛋白疫苗平台的构建与应 用。 本发明提供一种疫苗， 其包含有干扰素 ‑靶抗 原‑免疫球蛋白Fc区(或抗体)和Th细胞辅助表位 的融合蛋白。 本发明还涉及含有干扰素 ‑靶抗原‑ 免疫球蛋白Fc(或抗体)区和Th细胞辅助表位的 融合蛋白用于制备预防性或治疗性组合物的用 途。 本发明的疫苗可以通过真核细胞表达系统产 生， 制备野生型和各种突变抗原的疫苗， 通过皮 下/肌肉或者鼻腔等免疫途径进行接种， 能够引 起机体强烈的免疫应答。 本发明的疫苗可以作为 预防性或治 疗性疫苗 来使用。 权利要求书3页 说明书51页 序列表173页 附图16页 CN 115137812 A 2022.10.04 CN 115137812 A 1.一种疫苗， 其包含有干扰素 ‑靶抗原‑免疫球蛋白Fc区(或抗体Ab)为结构单元的融合 蛋白， 其中所述干扰素为第一结构单元， 可以是I型干扰素、 II型干扰素和/或III型干扰素例 如IFN‑α、 IFN‑β 、 IFN‑γ、 IFN‑M(IL‑29)、 IFN‑λ2(IL‑28a)、 IFN ‑λ(IL‑28b)和IFN ‑ω， 所述干 扰素可来自人源或鼠源， 优选所述干扰素为I型干扰素， 例如IFN ‑α， 例如小鼠IFN ‑α4、 人 IFN‑α 2、 人IFN ‑α 2的突变体(结合人和小鼠的IFN受体)， 例如SEQ  ID NO.1、 SEQ  ID NO.21、 SEQ ID NO.22氨基酸序列所示， 其中所述靶抗原为第三结构单元， 其所述靶抗原可以是例如肿瘤抗原， 病原体抗原， 如 病毒或细菌抗原， 其中所述靶抗原可以是例如与野生型不同的突变的靶抗原， 包括例如野 生型抗原的天然点突变/缺失突变/增多突变/截短体、 人工点突变/缺 失突变/增多突变/截 短体、 天然或人工突变的任何组合、 突变后所产生的亚型， 其中所述病毒可以是例如SARS ‑ COV‑2， 或者其中所述靶抗原可以是例如SARS ‑COV‑2病毒S蛋白全长或S1区， 例如所述靶抗 原可以为SEQ  ID NO.76或SEQ  ID NO.77所示的抗原， 其中所述 免疫球蛋白Fc区(或抗体)为第二结构 单元， 可以为IgG1、 IgG2、 IgG3、 IgG4和/ 或IgM的恒定区氨基酸序列， 例如IgG1的Fc区， 以及用于形成异源二聚体的IgG1 ‑Fc‑hole和 IgG1‑Fc‑knob的氨基酸序列SEQ  ID NO.2、 SEQ  ID NO.23、 SEQ  ID NO.24所示的Fc区， 其中 作为第二结构单元的所述抗体(包括例如抗体重链和轻链， 或单链抗体， 简称Ab)可以为DC 靶向活化 抗体， 包括anti ‑PD‑L1， anti‑DEC205， anti‑CD80/86等抗体， 任选地所述疫苗可以为靶向性疫苗， 任选地所述融合蛋白还可以包含一个或多个Th细 胞辅助表位和/或连接片段。 2.权利要求1所述的疫苗， 其中所述靶抗原是病毒抗原， 所述病毒可以为例如HBV， HPV， VZV， EBV， HSV ‑2， HIV， 流感病毒， 冠状病毒， 如SA RS‑COV， SARS‑COV‑2， MERS‑CoY， 例如， 所述 抗原可以是HBV抗原， 例如HBV  Pres1抗原， HBsAg抗原或肽段， 例如ad亚型或ay亚型HBV   Pres1抗原， 例如SEQ  ID NO.6氨基酸序列所示的ad亚型HB V Pres1抗原， 例如SEQ  ID NO.26 氨基酸序列所示的ay亚型HBV  Pres1抗原； 例如HBV  HBsAg抗原(包含各个亚型和肽段)， 例 如SEQ ID NO.7氨基酸序列所示的adr亚型HBV  HBsAg抗原， 例如SEQ  ID NO.27氨基酸序列 所示的adw亚型HB V HBsAg抗原， 例如SEQ  ID NO.28氨基酸序列所示的ayw亚型HBV  HBsAg抗 原； 例如， 所述抗原可以是例如SARS ‑COV‑2抗原， 例如SARS ‑COV2 RBD抗原， 例如SEQ  ID  NO.8氨基酸序列所示的SARS ‑COV2 RBD抗原； 例如流感病毒抗原， 例如流感病毒HA抗原， 例 如SEQ ID NO.9氨基酸序列 所示流感病毒HA抗原； 例如HPV抗原， 例如SEQ  ID NO.10氨基酸 序列所示的HPVE7抗原； 例如gE抗原， 例如SEQ  ID NO.91氨基酸序列所示的带状疱疹病毒 (VZV)gE抗原； 例如EBV ‑gp350， 例如SEQ  ID NO.92氨基酸序列所示的埃博斯坦 ‑巴尔病毒 (EBV)gp350 蛋白； 例如gD抗原， 例如SEQ  ID NO.93氨基酸序列 所示的单纯疱疹病毒2(HSV ‑ 2)gD抗原； 所述 抗原可以是例如EBV  EBNA1/LMP2， VZV ‑IE62， HSV‑2ICP0， HIV  gp120抗原。 其中所述靶抗原可以是突变的病毒抗原， 例如 前述任一病毒抗原的突变体， 例如SARS ‑ COV‑2的突变体， 包括例如SARS ‑COV‑2蛋白(例如S蛋白、 N蛋 白、 M蛋白、 E蛋 白中的一个或多 个)的天然点突变/缺 失突变/增多突变/截短体、 人工点突变/缺 失突变/增多突变/截短体、 天然或人工突变的任何组合、 突变后所产生的亚型， 例如所述突变的病毒抗原可以为野生 型SARS‑COV‑2的S蛋白全长(SEQ  ID NO.76)、 S1区(SEQ  ID NO.77)、 RBD区(SEQ  ID NO.78)权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115137812 A 2的突变体， 例如所述突变的病毒抗原可以包含SARS ‑COV‑2的S蛋白的下述一个或多个突变： NTD区域69 ‑70缺失、 Y144缺失、 242 ‑244缺失、 L18F、 D80A、 D215、 R246I突变， RBD区域K417、 E484、 N501Y， L452R突变， D614G， H655Y突变， 例如所述突变的病毒抗原可以包含存在于来源 于英国B.1.1.7(501Y.1)突变株、 南非B.1.351(501Y.2)突变株和巴西P1(501Y.3)突变株、 加州B.1.429突变株中的突变， 例如所述突变的病毒抗原可以包含SEQ  ID NO.79、 SEQ  ID  NO.80、 SEQ  ID NO.81、 SEQ ID NO.82中任一个所示突变的突变体， 例如所述突变的病 毒抗 原可以为包含SEQ  ID NO.79、 SEQ  ID NO.80、 SEQ  ID NO.81、 SEQ  ID NO.82中任 一个所示序 列的突变 体， 所述病毒抗原可以融合表达增强B细胞和T细胞应答的辅助多肽表位， 可以位于抗原表 位的N端或C端， 例如以Pan  HLADR‑binding表位(PADER)， 例如SEQ  ID NO.3其氨基酸序列所 示； 所述各个结构单元的连接片段为柔性多肽序列， 可以为连接片段1和2， 例如SEQ  ID  NO.4、 SEQ ID NO.25氨基酸序列所示， 所述结构单元组成的每一条多肽序列N端可以均含有能够促进蛋白分泌的相应信号 肽， 例如SEQ  ID NO.5氨基酸序列所示， 所述疫苗可以通过真核表达系统产生， 例如通过真核表达系统2 93F、 CHO细胞产生。 3.根据权利要求1或2所述的疫苗， 其中所述靶抗原是肿瘤抗原， 例如肿瘤细胞高表达 蛋白分子， 例如， 所述抗原可以是人表皮生长因子受体2(human  epidermal  growth factor  receptor  2， HER2/neu)和表皮生长因子(Epiderma1  growth factor receptor， EGFR)； 例 如， 肿瘤细胞高表达蛋白分子Her2及其各功能区和截短体， 例如SEQ  ID NO.85、 86、 97、 88、 89、 90所示的抗原及其 突变体。 4.权利要求1 ‑3任一项所述的疫苗， 其中所述融合蛋白为同源二聚体或者异源二聚体 融合蛋白， 任选地所述融合蛋白还可以在同源二聚体或者异源二聚体的任意一条或两条链 (即第一多肽链和/或第二多肽链)中包 含一个或多个Th细胞辅助表位和/或连接片段，